實驗通用規則：

1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。

8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。

儀器：

1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀（比色測定波長為550nm）

2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）

3、臺式離心機

4、漩渦混勻器

5、微量移液器

樣本收集與前處理：

血清（漿）可直接測定。

紅細胞：需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。

動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。

培養細胞、細菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。

具體的樣本前處理：參考我們隨貨發送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。

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測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時不能產生氣泡

2.溫

1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應疊在一起。

3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。

2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。

喹硫標準溶液 100μg/ml,u=5%魚脫氫表雄酮(DHEA)免疫試劑盒整聯蛋白重復蛋白3抗體GATA6  GATA結合蛋白6抗體

喹硫標準溶液 10μg/ml,u=5%魚褪黑素(MT)免疫試劑盒胰島素樣生長因子ⅡmRNA結合蛋白1抗體GATA-5  GATA結合蛋白5抗體

二喹啉 分析標準品，98%魚透明質(HA)免疫試劑盒胰島素樣生長因子ⅡmRNA結合蛋白2抗體GATA-4  GATA結合蛋白4抗體

喹禾靈 分析標準品，96%魚嗜性粒過氧化物酶(EPX)免疫試劑盒化整合素β4抗體GATA-3  GATA結合蛋白3抗體

精喹禾靈 分析標準品，99.7%魚生長激素(GH)免疫試劑盒胰島素樣生長因子結合蛋白1抗體GATA-2  GATA結合蛋白2抗體

砜嘧磺隆 分析標準品，98.5%魚腎上腺髓質素(ADM)免疫試劑盒胰島素樣生長因子結合蛋白4抗體GATA-1  珠蛋白轉錄因子1抗體

嘧磺隆 分析標準品，75%魚腎上腺素(EPI)免疫試劑盒整合素α7抗體Gastrin receptor/GASR  促胃泌素受體抗體

西草凈 分析標準品，97%魚神經肽Y(NPY)免疫試劑盒白介素7抗體Gastrin  胃泌素/蛙皮素抗體

西瑪津標準溶液 100μg/ml,u=2%魚溶菌酶(腎淀粉樣變)(LZM)免疫試劑盒白介素6受體α/IL-6Rα抗體GAS8  生長停滯特異性蛋白8抗體

西瑪津標準溶液 10μg/ml,u=5%魚熱休克蛋白HSP90α(HSP90AA1)免疫試劑盒白介素9抗體GAS7/Growth Arrest Specific Protein 7  生長休止特定蛋白7抗體

治螟標準溶液 10μg/ml,u=6～3%，酮（劇品）魚熱休克蛋白90(HSP-90)免疫試劑盒整合素αL抗體Integrin αLGAS2L3  生長停滯特異性蛋白2家族3抗體

硒標準溶液 100mg/L,溶劑：水魚熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒干擾素α抗體GAS2L1  生長停滯特異性蛋白2家族1抗體

氟蟲 分析標準品魚熱休克蛋白40(HSP-40)免疫試劑盒化肌聚鹽酶樣蛋白1抗體Gas1  生長休止特定蛋白1抗體

氟蟲 97%魚去腎上腺素(NE)免疫試劑盒化肌聚鹽酶樣蛋白1抗體GAS 6  生長停滯特異性蛋白6抗體

磺草酮 分析標準品，97.5%魚前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒抑制素βC抗體GARB1/GABAR  γ1氨丁受體β1抗體
α-葡萄糖苷酶（α - GC）測試盒脂肪炎癥因子Apelin抗原哌啉（標準品）Human, Mouse

Apelin receptor抗原吡哆（標準品）Human, Mouse

APG4B自噬相關抗原吡哆丁咯地爾（標準品）Human, Mouse

載脂蛋白A1抗原伯安喹(標準品)Human

凝聚素α/β抗原川芎（標準品）Human, Mouse, Rat

胰島素受體-α（抗原）二氫（標準品）Human

胰島素受體-α（抗原）肌鈉（標準品）Human

胰島素受體-β（抗原）咯萘啶（標準品）Human, Mouse, Rat

胰島素受體底物-1（抗原）喹（標準品）Human, Mouse

G蛋白偶聯受體GPR113蛋白抗體Phospho-Paxillin (Tyr118)/FITC  熒光素標記化樁蛋白Paxillin抗體IgG

甘肽受體1抗體PDI/FITC  熒光素標記蛋白質二硫鍵異構酶抗體IgG