熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 牛丘疹性口炎病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bovine Papular Stomatitis Virus(BPSV) | 貨號 | YSP96469 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
溴化亞銅(>98%,BR)PSMB8/LMP7 (1A5) Mouse mAb2,二氨基乙硫酸鹽 無水乙酸銅(>99%,BR)β-Canin (D10A8) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)丁二酸單甲酯(琥珀酸單甲酯) 溴化銅(>99%,BR)MOB1 (E1N9D) Rabbit mAb2-呋喃酸 檸檬酸銅(>98.5%,BR)GABARAP (E1J4E) Rabbit mAb1-辛基-2,二甲基咪唑溴鹽 氫氧化銅(>96.5%,ch Grade)Phospho-Progesrone Receptor (Ser294) Antibody2-溴己酸甲酯 草酸銅(>97%,ch Grade)Toll-like Receptor 2 (E1J2W) Rabbit mAb (Mouse Specific)1-氟環己 無水硫酸銅(>99%,BR)SignalSlide® PD-L1 IHC Controls(R)-氯-羥基丁 肌酸酐;肌酐Phospho-c-Myc (Ser62) (E1J4K) Rabbit mAb氨基-3,5-二氯甲酸 甲酚紫乙酸鹽(>70%,BS)SignalSlide® LKB1 IHC Controls(2S,3S)-1,2-環氧-(Boc-氨基)-基丁烷 酸性猩紅7B(>70%,BS)XRN2 (D6L5F) Rabbit mAb2-(2-氨基噻唑-基)乙酸乙酯 酸性紅44(BS)PTMScan® Succinyl-Lysine Motif [Succ-K] Kit2-氯-5-三氟甲基吡啶-甲酸 環胞甙鹽酸鹽；鹽酸環胞苷；安西他濱鹽酸鹽PHC1 (1F3F3) Mouse mAb亞硝酸異丁酯 5'-三酸胞苷三鈉鹽Semaphorin 4B Antibody1-甲基引唑-5-酸 細胞松弛素A(>98%，BR)TRIM25 (D9T7G) Rabbit mAb氯磺酰氯 細胞松弛素C(>98%，BR)KISS1R (D9D7C) Rabbit mAb4'-叔丁基-甲氧基二酰 細胞松弛素 D(>98%，BR)Phospho-Rpb1 CTD (Ser7) (E2B6W) Rabbit mAb氯化酰膽鈣鹽 細胞松弛素E(>98%，BR)UFD1 Antibody5-溴-2-羥甲基吡啶 D-樟腦酸(>99%,BR)CDCP1 (D1W9N) Rabbit mAb8-溴-7-羥基喹啉
牛丘疹性口炎病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒甘露糖受體(MR)ELISA試劑盒GSK-3 alpha 葡萄糖合成激酶-3α抗體100 ul 甘露糖凝集素受體(MBLR)ELISA試劑盒Phospho GSK3 alpha (Ser21) 酸化葡萄糖合成激酶3α抗體100 ul 甘露糖結合蛋白/甘露糖結合凝集素(MBP/MBL)ELISA試劑盒Phospho-Glycogen synthase 1(Ser641) 酸化葡萄糖合成酶1抗體100 ul 甘露糖(Mannose)ELISA試劑盒GSK-3 Beta (CT) GSK-3β抗體葡萄糖合成激酶-3β抗體1 Kit 甘露聚糖結合凝集素絲氨酸肽1(C4/C2 RA反應因子的激活因子)(MASP1)ELISA試劑盒GSK-3 Beta (CT) 葡萄糖合成激酶-3β抗體100 ul 甘膽酸(CG)ELISA試劑盒phospho-GSK-3 Beta(Ser9) 酸化葡萄糖合成激酶3β抗體100 ul 甘氨酸ELISA試劑盒phospho-GSK-3 Beta(Thr390) 酸化葡萄糖合成激酶3β抗體5 mg 干細胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒phospho-GSK3 Alpha/Beta(Tyr279+Tyr216) 酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗體100 ul 干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒GSK-3 Beta (NT) 糖原合酶激酶-3β抗體100 ul |
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